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            臨床PCR實驗室中引起假陽性和假陰性的有關因素

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            臨床PCR實驗室中引起假陽性和假陰性的有關因素

            2019/06/13 08:39
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            【摘要】:

            與試劑盒設計制造有關的因素 試劑盒中引物的選擇, 反應過程中諸如鎂離子濃度、PH、溫度、循環周期各階段的時間與循環次數等都可對擴增過程中的敏感性、特異性産生極大的影響
             
            與試劑盒設計制造有關的因素 試劑盒中引物的選擇, 反應過程中諸如鎂離子濃度、PH、溫度、循環周期各階段的時間與循環次數等都可對擴增過程中的敏感性、特異性産生極大的影響, 如通過高溫變性解鍊的DNA單鍊在50℃左右可與體系中存在的引物寡核苷酸片段結合,這一個溫度是折衷的選擇,若溫度更低(如37℃)擴增, 效率可進一步提高, 但引物與模闆間的錯配現象增多, 可緻非特異性擴增, 提高溫度可使反應的特異性增強, 但總的反應效率下降。
             
            DNA擴增儀的影響 擴增儀主要的性能指标是其反應溫度的準确性和溫度分布的均勻性。反應,尤其是随機引物PCR對于反應環境的微小變化(如溫度)極為敏感, 可因此直接影響反應結果的重複性。一般地擴增儀加熱塊中位于中間部位的樣品反應井的溫度較周邊井的更為恒定。另外, 擴增儀工作過程中溫度變化所需要的時間也是影響反應結果的一個因素。如儀器升溫或降溫所需時間與試劑盒所要求的時間差異較大時, 則可能影響反應結果。
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