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            PCR實驗室的污染及處理污染措施

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            PCR實驗室的污染及處理污染措施

            2019/06/27 08:43
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            【摘要】:
            PCR實驗室所有人員應充分認識預防污染的重要性,了解産生污染的原因
             
            熒光PCR的污染分為實驗前的污染和實驗進行中的污染。實驗前的污染是指實驗材料的污染,主要是病人标本來源的核酸;而實驗進行中的污染,通常實驗過程中的每一步驟都可能發生對樣本的污染。
             
            核酸的制備是較常産生污染的過程,熒光PCR反應進行過程中所涉及到的實驗設備的任何部位,也是可能的污染源。而 PCR産物是個高度危險的污染源,通常的陽性PCR産物含有大量的目标模闆分子,極易洩露産生氣溶膠污染整個實驗室。 
             
            在日常工作中需要加強對污染的監測,每次PCR實驗務必做各種陰陽性對照。①陽性對照:陽性對照要選擇擴增度中等、重複性好的模闆進行,監測PCR反應是否成功且是否合乎理論要求。②标本對照:被檢測的标本是血清就用鑒定後的正常血清作對照。③試劑對照:在PCR試劑中不加模闆DNA或RNA,進行PCR擴增,以監測試劑及環境是否污染。有時輕微的氣溶膠污染還需要複管試驗、重複性試驗等。 
             
            所以PCR實驗室所有人員應充分認識預防污染的重要性,了解産生污染的原因,如:①标本間交叉污染。在核酸提取過 程中一定要小心操作,防止飛濺,做好标記,避免樣本間的交叉污染。配好反應液并加入待測核酸後,須蓋好反應管,要有明确的樣品處理程序。②PCR試劑的污染。主要是由于在PCR試劑的配置過程中加樣槍、容器、雙蒸水及其他溶液被PCR核酸模闆污染。③PCR擴增産物污染。主要是氣溶膠污染 ,一定要選用質量好的離心管和反應管,避免試劑飛濺、外洩。同時要有高度的責任感,反應完畢後應及時把反應物清理掉,避免熒光PCR後的産物反應管在工作區内打開。
             
            要避免污染,首先應是預防而不是排除污染。實驗室工作區的嚴格劃分的目的就是為了預防污染,工作區之間傳遞窗的設置,一方面方便了試劑、樣品等在不同實驗室區間的傳遞;另一方面也增加了交叉污染的危險,因此要定期對傳遞窗進行處理或用移動紫外燈照射。工作結束後必須對工作區進行清潔,用10%次氯酸鈉擦拭,再用70%乙醇擦拭,然後再用可移動紫外燈調至實驗台上60~90cm内過夜照射,可有效打斷擴增産物。一旦污染發生,應立即進行清潔衛生、稀鹽酸液擦拭或浸泡、通風疏散、紫外燈照射、酸霧處理等措施,盡快消除污染。也可選用不同區域的引物進行PCR擴增,盡快恢複正常工作狀态。造成熒光PCR污染的原因很多也較複雜的,因此對熒光PCR實驗室進行嚴格的科學管理。
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